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如何使PI染色取得更好的效果

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如何使PI染色取得更好的效果

发布日期:2018-03-05 作者: 点击:

如何使PI染色取得更好的效果

为了使PI染色能够取得更好的效果,细胞通常需要用乙醇破膜,以使PI能够进入到核内。然而,用乙醇处理后,容易导致胞内可溶性的GFP在破膜后漏出,从而使GFP荧光降低或缺失。用固定剂(如多聚甲醛)虽然可以保留住细胞内的GFP,但是容易导致G0/G1峰的CV系数过大,可通过先固定、再破膜的方法,即先用1%多聚甲醛固定,然后用70%乙醇破膜,较后用含RNAse的PI染液染色。
但是,一定要设置好两个对照:
(1) GFP转染的细胞,不加PI;
(2)未转染GFP,未加药的细胞,加PI。

PI染色: 300×g离心5分钟(4℃),去上清,加入1ml PI工作液,常温孵育30分钟。
过滤,上机分析。
计数细胞:往流式管中加入1×10E6细胞,PBS洗涤一次(300×g离心5分钟,4℃)
用多聚甲醛固定细胞:去上清,加入500 μl 冷PBS,轻柔混匀。加入500 μl冷(4°C)固定液,再次混匀。4℃孵育1小时。
不同种类的细胞,需要不同浓度的多聚甲醛,以获得较佳的保留GFP的效果、获得较好的CV值。
乙醇破膜:300×g离心5分钟(4℃),去上清,再次用3ml冷PBS洗涤1次。逐滴加入1ml 70%的乙醇(-20℃),边加边振荡混匀,4℃孵育过夜。
注意,多聚甲醛固定之后,细胞可能分散在管底,肉眼很难看见。加入乙醇时,振荡动作需要轻柔,乙醇孵育至少2小时以上。
酚磺乙胺(E1830000

芬替康唑 杂质D 
芬太尼 
芬布芬 
芬苯达唑 杂质B(F0040020
芬苯达唑 杂质A(F0040010
非索非那定 杂质C 
非索非那定 杂质B 
非诺特罗:用于峰鉴别试验 
非诺贝特 杂质G 
非诺贝特 杂质B 
非诺贝特 杂质A


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